Genetic analysis and cAMP measurement: comparison between lean and obese anovulating mice / Análise genética e dosagem de AMP cíclico: comparação entre camundongos fêmeas anovuladoras magras e obesas

PURPOSE: To evaluate genes differentially expressed in ovaries from lean (wild type) and obese (ob/ob) female mice and cyclic AMP production in both groups. METHODS: The expression on messenger RNA levels of 84 genes concerning obesity was analyzed through the PCR array, and cyclic AMP was quantified by the enzyme immunoassay method. RESULTS: The most downregulated genes in the Obesity Group included adenylate cyclase-activating polypeptide type 1, somatostatin, apolipoprotein A4, pancreatic colipase, and interleukin-1 beta. The mean decrease in expression levels of these genes was around 96, 40, 9, 4.2 and 3.6-fold, respectively. On the other hand, the most upregulated genes in the Obesity Group were receptor (calcitonin) activity-modifying protein 3, peroxisome proliferator activated receptor alpha, calcitonin receptor, and corticotropin-releasing hormone receptor 1. The increase means in the expression levels of such genes were 2.3, 2.7, 4.8 and 6.3-fold, respectively. The ovarian cyclic AMP production was significantly higher in ob/ob female mice (2,229±52 fMol) compared to the Control Group (1,814±45 fMol). CONCLUSIONS: Obese and anovulatory female mice have reduced reproductive hormone levels and altered ovogenesis. Several genes have their expression levels altered when leptin is absent, especially adenylate cyclase-activating polypeptide type 1. .

OBJETIVO: Avaliar os genes diferencialmente expressos em ovários de camundongos fêmeas magras (tipo selvagem) e obesas (ob/ob) e a produção de AMP cíclico em ambos os grupos. MÉTODOS: A expressão nos níveis de RNA mensageiro de 84 genes relacionados à obesidade foi analisada por PCR Array, e o AMP cíclico foi quantificado por método imunoenzimático. RESULTADOS: Os genes que mais sofreram diminuição da expressão no Grupo Obesidade incluíram o tipo 1 de polipeptídeo ativador da adenilato ciclase, o da somatostatina, da apolipoproteína A4, da colipase pancreática e da beta interleucina 1. A média de redução na expressão desses genes foi de aproximadamente 96, 40, 9, 4,2 e 3,6 vezes, respectivamente. Por outro lado, os genes que mais tiveram aumento na expressão no Grupo Obesidade foram o gene da proteína modificadora da atividade do receptor de calcitonina 3, do proliferador de peroxissomos ativados por proteína alfa, do receptor de calcitonina e do receptor para hormônio liberador de corticotropinas 1. As médias de acréscimo nos níveis de expressão de tais genes foram de 2,3, 2,7, 4,8 e 6,3 vezes, respectivamente. A produção de AMP cíclico ovariana foi significantemente aumentada em camundongos fêmeas ob/ob (2.229±52 fMol) quando comparada ao Grupo Controle (1.814±45 fMol). CONCLUSÕES: Camundongos fêmeas obesas e anovuladoras possuem níveis de hormônio reprodutivo reduzidos e ovulogênese alterada. Vários genes mostram níveis de expressão alterados quando a leptina está ausente, principalmente o tipo 1 de polipeptídeo ativador da adenilato ciclase. .

Response of peripheral blood mononuclear cells to conditioned medium from cultured oral squamous cell carcinomas

The current study investigated the capacity for tumor factors secreted by head and neck squamous cell carcinoma (HNSCC) cell lines, KB, KB16, and HEP, to induce the secretion of various cytokines from peripheral blood mononuclear cells (PBMCs). PBMCs were isolated from blood samples collected from six healthy volunteers and these cells were incubated for 6, 24, 48, or 72 hours in the presence of 50 percent conditioned medium collected from cultured cell lines pretreated with, or without, stimulants such as phytohemagglutinin (PHA) or lipopolysaccharides (LPS). Aliquots of each supernatant were then assayed for levels of IFN-Γ, vascular endothelial growth factor (VEGF), TNF-α, and IL-4 using enzyme linked immunosorbent assays (ELISAs). Data collected were analyzed using Student's t-test, an ANOVA test followed by Tukey's test, and tests of Pearson's Correlation. PBMCs cultured with KB16-conditioned medium produced the highest levels of IFN-Γ. VEGF was also detected in conditioned media collected from all of the squamous cell carcinoma (SCC) cell lines used, and a significant difference in VEGF levels between control and KB- or KB16-conditioned media was observed. TNF-α was secreted by all PBMC groups within 6 hours of receiving conditioned media, and these levels increased up to the 24 hour timepoint, after which levels of TNF-α stabilized. In contrast, none of the supernatant samples contained detectable levels of IL-4. In combination, these data suggest that direct contact between fresh human PBMCs and conditioned media from tumor cells induces the secretion of TNF-α and VEGF by PBMCs, and this represents an initial angiogenic response.

A simple method to measure cell viability in proliferation and cytotoxicity assays

Resazurin dye has been broadly used as indicator of cell viability in several types of assays for evaluation of the biocompatibility of medical and dental materials. Mitochondrial enzymes, as carriers of diaphorase activities, are probably responsible for the transference of electrons from NADPH + H+ to resazurin, which is reduced to resorufin. The level of reduction can be quantified by spectrophotometers since resazurin exhibits an absorption peak at 600 çm and resorufin at 570 çm wavelengths. However, the requirement of a spectrophotometer and specific filters for the quantification could be a barrier to many laboratories. Digital cameras containing red, green and blue filters, which allow the capture of red (600 to 700 çm) and green (500 to 600 çm) light wavelengths in ranges bordering on resazurin and resorufin absorption bands, could be used as an alternative method for the assessment of resazurin and resorufin concentrations. Thus, our aim was to develop a simple, cheap and precise method based on a digital CCD camera to measure the reduction of resazurin. We compared the capability of the CCD-based method to distinguish different concentrations of L929 and normal Human buccal fibroblast cell lines with that of a conventional microplate reader. The correlation was analyzed through the Pearson coefficient. The results showed a strong association between the measurements of the method developed here and those made with the microplate reader (r² = 0.996; p < 0.01) and with the cellular concentrations (r² = 0.965; p < 0.01). We concluded that the developed Colorimetric Quantification System based on CCD Images allowed rapid assessment of the cultured cell concentrations with simple equipment at a reduced cost.

A ulceraçäo aftosa recorrente analisada por microarray de cDNA tem expressäo gênica de resposta imune do tipo Th1 / The recurrent aphtous ulceration analyzed by cDNA microarray has a Th1 gene expression profile

Objetivo: Identificar o padrão de expressão génica da Ulceração Aftosa Recorrente e classificar o tipo da resposta imune T-Helper a partir da comparação da expressão gênica da -doença com controle normal, usando a técnica de microarray de cDNA. Métodos: Vinte e nove pacientes portadores de ulceração aftosa recorrente (Grupo Teste), com pelo menos uma crise a cada quinze dias, foram submetidos, na fase aguda da doença, a biópsia da lesão ulcerada. Onze voluntários saudáveis (Grupo Controle), livres da doença, foram submetidos a biópsia de mucosa clinicamente normal. O RNA total das amostras foi isolado e dois pools de RNAs, representado os Grupos, foram formados, usando-se quantidades iguais do RNA de cada amostra. A sonda radioativa de cDNA foi preparada a partir de 17 gg do RNA total através da reação de transcrição reversa. As sondas foram hibridadas com as membranas de microarray em duplicata. As imagens dos microarrays hibridados foram obtidas por varredura realizada em scaner a laser. Os alvos de cDNAs, marcados nas membranas, foram localizados e quantificados usando-se sofiware específico. As normalizações dos pares de membranas foram executadas através do modelo linear de ajuste local, baseado no método de suavização conhecido como Lowess. Os genes foram considerados diferencialmente expressos quando o valor da média da diferença de expressão das membranas, entre Teste e Controle, era maior do 2x e, o valor da média de expressão gênita era maior do que o nível do gene controle negativo da membrana. Para analisar o padrão da resposta imune, foram selecionados, no microarray, genes associados com atividades Th1 (n=36) ou Th2 (n=19) e, as médias da diferença de expressão desses genes foram comparadas com a dos genes constitutivos (N=13). Resultados: Foram identificados vinte e um genes hiper-expressos e vinte Kipoexpressos no Grupo Teste. O nível médio de expressão dos genes Th1 no Grupo Teste foi maior (p<0,05) do que no Grupo Controle. Por outro lado, a média dos genes Th2 foi a mesma nos dois Grupos. Conclusões: O microarray de cDNA permitiu a identificação dos padrões gênitos da Ulceração Aftosa Recorrente e da mucosa controle e possibilitou classificar a Ulceração Aftosa Recorrente como doença Th1

Metodologia computadorizada para avaliaçäo do estado bucal dos candidatos ao curso de graduaçäo em educaçäo física da Universidade de Säo Paulo / Computerized methodology for evaluation of the oral status of applicants to the physical education course at Säo Paulo University

Apresenta-se um novo método computadorizado de coleta de dados para a análise epidemiológica dos estados de saúde bucal, testado nos canditados ao curso de Educaçäo Física da Universidade de Säo Paulo. Foi utilizado um equipamento contendo, como interface de comunicaçäo entre o operador e a máquina, uma moldura de infravermelho acoplada ao monitor. Esse novo instrumento possibilitou o registro dos dados coletados sem que houvesse o contato físico do operador com aparelho. Elaborou-se, também, um programa que facilitou o uso desse novo recurso e permitiu a emissäo, durante o exame, de gráficos e de relatórios relativos aos dados coletados. O sistema mostrou ser eficiente nesse tipo de trabalho, devido à menor demanda de tempo gasto na coleta e na análise dos índices, ao pouco desgaste do operador e à manutençäo da assepsia, viabilizando, dessa forma, a obtençäo de resultados em termos de censo da populaçäo estudada

Expressäo da proteína p53 em carcinomas epidermóides de mucosa bucal / Expression of p53 protein in squamous cell carcinomas of the oral mucosa

O presente trabalho teve por objetivo estudar a expressäo da proteína p53 em 24 casos de carcinoma epidermóide de mucosa bucal. A expressäo de p53 foi verificada pela técnica imunohistoquímica da estreptativina-biotina, após pré-tratamento das amostras em ambiente de microondas. Cinqüenta e quatro por cento dos carcinomas expressaram p53 em intensidade e padräo variados. Em 69 por cento dos casos, a marcaçäo foi observada em mais de 50 por cento das células neoplásicas. Procuramos, adicionalmente, verificar correlaçäo entre a expressäo de p53 e alguns parâmetros clínicos, tais como: idade, sexo dos pacientes, localizaçäo, dimensäo e tempo de evoluçäo da lesäo. A correlaçäo entre a expressão e a idade dos pacientes foi estatisticamente significativa. Näo foi observada correlaçäo estatísticamente significativa para os outros parâmetros clínicos

Análise comparativa in vitro da qualidade do selamento marginal apical de cones estandardizados e cones secundários calibrados com régua calibradora Maillefer / In vitro comparative analysis of the quality of marginal apical sealing of standardized cones and accessory cones calibrated by Maillefer scale

A obturaçäo do sistema radicular visa promover um selamento hermético, no intuito näo só de preservar a sanificaçäo alcançada durante a fase de preparo do canal, como também de impedir que germes e exsudatos da regiäo periapical invadam o espaço radicular. Tem-se demonstrado que canais radiculares vazios, mesmo quando estéreis, atuam como verdadeiros tubos de ensaio, adequados à proliferaçäo de microorganismos e favorecendo a instalaçäo, ou mesmo, a manutençäo de processos infecciosos na regiäo apical. Por outro lado, sabe-se que a correta adaptaçäo do cone mestre de obturaçäo à regiäo apical, preparada com o último instrumento utilizado durante o preparo do canal, depende fundamentalmente da perfeita coincidência entre o diâmetro do instrumento e o cone de abturaçäo. Neste estudo, avaliaram-se, através do grau de penetraçäo marginal apical do corante azul de metileno, as condiçöes de adaptaçäo de cones de guta-percha estandardizados frente aos cones de guta-percha secundários calibrados com régua calibradora marca Maillefer. Pôde-se concluir que os cones de guta-percha secundários calibrados permitiram menor infiltraçäo marginal apical do corante azul de metileno quando comparados com os cones de guta-percha estandardizados

Transmissäo de imagens clínicas digitalizadas em microcomputador (workstation) ligado a computador (servidor) através de rede local / Digitized clinical images transmitted from workstations (terminals) to a server computer through local network

No presente trabalho, os autores descrevem uma alternativa para captaçäo, digilizaçäo e transmissäo de imagens entre computador (servidor) e microcomputadores (estaçöes de trabalho) ligados através de rede local, com vistas ao apoio ao ensino e à pesquisa em Estomatologia Clínica

Estudo da eficiência de escovas dentais aromatizadas na motivaçäo de higiene bucal em crianças / Study about the efficiency of scented toothbrushes upon the oral hygiene motivation of children

Foi realizado um estudo com setenta crianças de 7 a 11 anos, com o intuito de avaliar a eficiência do uso de escovas dentais aromatizadas na motivaçäo de crianças, em comparaçäo com escovas convencionais (näo aromatizadas). Após a análise estatística dos dados, chegou-se a conclusäo de que as escovas dentais aromatizadas, parecem ser eficientes na motivaçäo de crianças